欧博官网iELisa伏马毒素B1检测试剂盒
- 提要
伏马毒素是串珠镰刀菌、轮状镰刀菌和多育镰刀菌等爆发的。伏马毒素B1和B2是自然界保存普遍且毒性qiang的两种毒素。其主要保存于玉米及玉米制品中，在大米、面条、调味品、高粱以及啤酒中也有较低浓度的伏马毒素保存。1993年伏马毒素被癌症研究机构（IARC）归类为2B类致癌物。
- 原理
测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入伏马毒素标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的伏马毒素与酶标抗原竞争团结抗体，抗体或抗体团结物与牢靠在微孔板上的抗抗体再团结，没有团结的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中伏马毒素含量成负相关，与标准曲线较量即可得出伏马毒素的含量。
- 试剂盒的组成
- 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12条×8 孔）
- 伏马毒素B1标准品：0 ng/mL、1 ng/mL、 4ng/mL、10ng/mL、50ng/mL 1瓶 × 1.0mL
- Fum酶标抗原： 1瓶 ×10mL
- Fum抗体： 1瓶 ×10mL
- 10× 浓缩洗涤液： 1瓶 × 50mL
- Fum稀释缓冲液A： 1瓶 × 50mL
- Fum稀释缓冲液B： 1瓶 × 50mL
- 显色底物TMB： 1瓶 × 17mL
- 终止液： 1瓶 × 7mL
- 试剂盒说明书： 1份
- 质检报告： 1份
- 需要的仪器、试剂
1）仪器
- 酶标仪450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）
- 微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
- 多功效旋转混淆器（或者摇床、高速均质器）
- 酶标板振荡器
- 涡旋混淆器
- 50mL离心管
- 1.5mL离心管
- 定性滤纸
- 过滤漏斗
- 天平：感量0.01g
- 试剂
- 样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL纯水，混匀。
- 样品处置惩罚
5.1谷物（玉米、小麦、高粱、大米、大豆）：
- 称取5.0g破损样品于50mL离心管中，加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功效旋转混淆器上振荡10分钟（或使用高速均质器均质3分钟，或摇床上振荡40分钟）。
- 将提取液用通俗滤纸过滤，吸收50μL滤液置于1.5mL离心管中，加入450μL Fum稀释缓冲液A，用涡旋混淆器混匀。
稀释倍数：50
5.2饲料：
- 称取5.0g破损样品于50mL离心管中，加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功效旋转混淆器上振荡10分钟（或使用高速均质器均质3分钟，或摇床上振荡40分钟）。
- 将提取液用通俗滤纸过滤，(重大基质样品建议用0.22μm有机系滤膜过滤后使用)，取20μL滤液置于1.5mL离心管中，加入780uL Fum稀释缓冲液B，用涡旋混淆器混匀。
稀释倍数：200
5.3啤酒：
取5mL啤酒超声5分钟，取100μL超声后啤酒样品于1mL离心管中，加入900μL Fum稀释缓冲液B，用涡旋混淆器混匀。
稀释倍数：10
6． 酶联免疫剖析程序
6.1测定之前注重事项
- 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
- 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
- 在ELISA剖析中的再现性，很洪流平上取决于洗板的一致性，准确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
- 所有温育历程应阻止阳光直射，并按要求用盖板笼罩住酶标板。
6.2溶液的配制
- 提取液的配制: 凭证实验所需的量配制70%的甲醇水溶液（水要用纯水、或蒸馏水、去离子水）
- 洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用纯水稀释10倍后使用。（例如：取10 mL 浓缩液+90 mL纯水, 可以用于32孔的检测）。
6.3测定程序
- 将足够标准品和样品所用数目的孔条插入酶标板架，标准品和样品做两个平行实验，纪录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏生涯。
- 吸收50μL 标准品或样品划分加至响应的微孔（双孔）中，然后各加入50μL Fum酶标抗原，再加入50μL Fum抗体，加盖，在室温温育30分钟（每个标准品和样品必需使用新的吸头）。
- 倒出孔中的液体，每孔加入250μL 稀释好的洗涤液，置于酶标板振荡器上振荡30秒（或者手工振荡），重复操作四次。洗完后用力在吸水纸上拍干。
- 每孔加入150μL显色底物TMB，室温避光温育10分钟。
- 每孔加入50μL 终止液。
- 置于酶标仪中，振荡混匀，在450nm处测定吸光度值（OD值），参比波长630nm。（iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值）。
7. 效果判断
1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以DI一个标准（0标准）的吸光度值（B<苏b>0）再乘以100%，即百分吸光度值。
以伏马毒素B1标准品浓度值（ppb）为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，盘算出样本溶液浓度。使用盘算机专业软件，更便于大宗样品的快速剖析。
- 样品的现实浓度为读数效果乘以响应稀释倍数。
- 若是测定值凌驾检测规模，样品提取溶液按一定的比例用70%甲醇举行稀释。
8. 注重事项
- 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
- 在洗板历程中若是泛起板孔干燥过久的情形，则会泛起标准曲线不可线性，重复性欠好的征象。以是洗板排干后应连忙举行下一步操作。
- 标准物质和显色液对光敏感，阻止直接袒露在光线下。
- 混淆要匀称，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混淆匀称）。
- 终止液为强酸性物质，阻止接触皮肤。
- 不要使用过了有用期的试剂盒，也不要混淆使用差别批次的试剂盒，这样会引起测定效果禁绝确。
- 试剂盒的贮存条件是2-8℃，切勿冷冻。
9. 欧博官网iELisa伏马毒素B1检测试剂盒的性能指标
- 检测限LOD: 谷物30ppb(μg/kg)，饲料120ppb，
啤酒6ppb（LOD：空缺样品测定值+2倍标准误差SD）
- 定量限LOQ: 谷物50ppb，饲料200ppb，啤酒10ppb。
- 定量检测规模：谷物50-2500ppb，饲料200-10000ppb，啤酒10-500ppb。
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