欧博官网iELisaT-2毒素检测试剂盒

1. 提要

T2毒素（T2）是由多种镰刀菌爆发的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品
，对人类康健及畜牧业组成了较大危害。T-2毒素主要影响血液
，肝脏
，肾脏
，胰腺肌肉及淋巴细胞的功效
，T-2毒素中毒后的一样平常临床症状为厌食、吐逆、腹泻、生长障碍、滋生和神经性能障碍等。使用T2毒素试剂盒则能够快速而准确的剖析样品中T2毒素残留。

1. 原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有偶联抗原。划分加入T2毒素标准品或样品、酶标记物和抗体于微孔中
，样品/标准品竞争团结抗体
，酶标记物可与一抗团结
，再于酶标版上的包被抗原团结。反应洗涤后
，加入TMB底物显蓝色
，加入终止液后颜色由蓝变黄
，用酶标仪在450nm处检测
，吸光值与样品中T2毒素含量成负相关
，与标准曲线较量即可得出T2毒素的含量。

1. 试剂盒的组成

1. 包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔
   ，12条×8 孔）
2. T2毒素标准品：0ng/mL、0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20ng/mL                        1 瓶 × 1.0mL
3. T2抗体                      1瓶 ×10mL
4. 酶标记物                    1 瓶 ×10mL
5. 10× 浓缩洗涤液：            1瓶 × 50mL
6. T2稀释缓冲液A：             1瓶 × 50mL
7. T2稀释缓冲液B：             1瓶 × 50mL
8. 显色底物TMB：              1瓶 × 17mL
9. 终止液：                     1瓶 × 7mL
10. 试剂盒说明书：               1份
11. 质检报告：                   1份

1. 需要的仪器、试剂

1）仪器   

1. 酶标仪450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）
2. 微量移液器：20μL-200μL单道
   ，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
3. 多功效旋转混淆器（或者摇床、高速均质器）
4. 酶标板振荡器
5. 涡旋混淆器
6. 50mL离心管
7. 1.5mL离心管
8. 定性滤纸
9. 过滤漏斗
10. —天平：感量0.01g

1. 试剂

1. 样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇
   ，加300mL纯水
   ，混匀。

1. 样品处置惩罚

5.1谷物（玉米、小麦、高粱、大米、大豆）：

1. 称取5.0g破损样品于50mL离心管中
   ，加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功效旋转混淆器上振荡30分钟（或使用高速均质器均质3分钟
   ，或摇床上振荡40分钟）。
2. 将提取液用通俗滤纸过滤
   ，吸收100μL滤液置于1.5mL离心管中
   ，加入900μL T2稀释缓冲液A
   ，用涡旋混淆器混匀。

稀释倍数：50

5.2饲料：

1. 称取5.0g破损样品于50mL离心管中
   ，加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功效旋转混淆器上振荡30分钟（或使用高速均质器均质3分钟
   ，或摇床上振荡40分钟）。
2. 将提取液用通俗滤纸过滤
   ，用0.22μm有机系滤膜过滤后
   ，取100μL滤液置于1.5mL离心管中
   ，加入900uL T2稀释缓冲液B
   ，用涡旋混淆器混匀。

稀释倍数：50

6． 酶联免疫剖析程序

6.1测定之前注重事项

1. 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
2. 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
3. 在ELISA剖析中的再现性
   ，很洪流平上取决于洗板的一致性
   ，准确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4. 所有温育历程应阻止阳光直射
   ，并按要求用盖板笼罩住酶标板。

6.2溶液的配制

1. 提取液的配制: 凭证实验所需的量配制70%的甲醇水溶液（水要用纯水、或蒸馏水、去离子水）
2. 洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用纯水稀释10倍后使用。（例如：取10 mL 浓缩液+90 mL纯水, 可以用于32孔的检测）。

6.3测定程序

1. 将足够标准品和样品所用数目的孔条插入酶标板架
   ，标准品和样品做两个平行实验
   ，纪录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏生涯。
2. 划分吸收50μL标准品和样品加至响应的微孔（双孔）中
   ，然后再各加入50μL的酶标记物
   ，后加入50μL的T2抗体
   ，装入袋中密封
   ，室温（25℃）温育20分钟。
3. 倒出孔中的液体
   ，每孔加入250μL稀释好的洗涤液洗涤
   ，重复操作四次。洗板时每次距离30s
   ，洗完后用力在吸水纸上排干。
4. 每孔加入100μL显色底物
   ，避光室温（25℃）温育10分钟。
5. 每孔加入50μL终止液
   ，混匀。
6. 置于酶标仪中
   ，振荡混匀
   ，在450nm处测定吸光度值（OD值）
   ，参比波长630nm。（iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值）。

7.  效果判断

1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以DI个标准（0标准）的吸光度值（B<苏b>0）再乘以100%
，即百分吸光度值。

以T2毒素标准品浓度值（ppb）为X轴
，百分吸光度值为Y轴
，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法
，盘算出样本溶液浓度。使用盘算机专业软件
，更便于大宗样品的快速剖析。

1. 样品的现实浓度为读数效果乘以响应稀释倍数。
2. 若是测定值凌驾检测规模
   ，样品提取溶液按一定的比例用70%甲醇举行稀释。

8.  注重事项

1. 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
2. 在洗板历程中若是泛起板孔干燥过久的情形
   ，则会泛起标准曲线不可线性
   ，重复性欠好的征象。以是洗板排干后应连忙举行下一步操作。
3. 标准物质和显色液对光敏感
   ，阻止直接袒露在光线下。
4. 混淆要匀称
   ，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混淆匀称）。
5. 终止液为强酸性物质
   ，阻止接触皮肤。
6. 不要使用过了有用期的试剂盒
   ，也不要混淆使用差别批次的试剂盒
   ，这样会引起测定效果禁绝确。
7. 试剂盒的贮存条件是2-8℃
   ，切勿冷冻。

9.  欧博官网iELisaT-2毒素检测试剂盒的性能指标

1. 检测限LOD: 谷物10ppb(μg/kg)
   ，饲料15ppb
   ，（LOD：空缺样品测定值+2倍标准误差SD）
2. 定量限LOQ: 谷物25ppb
   ，饲料30ppb。
3. 定量检测规模：谷物25-1000ppb
   ，饲料30-1000ppb。